Human Collagenase II (Collagenase II) Kit ELISA Arahan Penggunaan

Kolagenase manusia II ( Collagenase II ) Manual arahan kit ELISA

Reagen ini adalah untuk kegunaan penyelidikan sahaja. Spesimen: serum atau plasma

Bekalan Biologi Fanke

Tujuan: Kit untuk penentuan kandungan serum manusia , plasma dan cecair biologi lain kolagenase II (Collagenase II) .

Prinsip ujian:

Kit Collagenase II ialah ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) sandwic fasa pepejal. Piawaian kepekatan Collagenase II yang diketahui dan sampel kepekatan yang tidak diketahui ditambah pada mikroplat untuk pengesanan. Kolagenase II dan antibodi terbiotinilasi pertama kali diinkubasi. Selepas mencuci, HRP berlabel avidin telah ditambah. Selepas pengeraman dan pencucian, konjugat enzim yang tidak terikat dikeluarkan, kemudian substrat A, B, dan konjugat enzim ditambah secara serentak. Menghasilkan warna. Kedalaman warna adalah berkadar dengan kepekatan Collagenase II dalam sampel.

Kit kolagenase II , arahan kit elisa, kit ELISA, kit ELISA, arahan kit elisa manusia

Kandungan kit dan penyediaannya

Bahan serba lengkap

1. Air suling.

2. Pensampel: 5ul, 10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 500ul, 1000ul.

3. Pengayun dan pengacau magnet, dsb.

keselamatan

1. Elakkan sentuhan langsung dengan larutan henti dan substrat A, B. Setelah terdedah kepada cecair ini, bilas dengan air secepat mungkin.

2. Jangan makan, minum, merokok atau menggunakan kosmetik semasa eksperimen.

3. Jangan gunakan mulut anda untuk mengambil apa-apa bahan dari kit.

Langkah berjaga-jaga operasi

1. Reagen hendaklah disimpan mengikut arahan label dan dikembalikan ke suhu bilik sebelum digunakan. Piawaian selepas pencairan hendaklah dibuang dan tidak boleh disimpan.

2. Bilah yang tidak digunakan dalam eksperimen hendaklah segera dimasukkan semula ke dalam beg dan dimeterai untuk mengelakkan kemerosotan.

3. Reagen lain yang tidak digunakan hendaklah dibungkus atau ditutup. Jangan campurkan reagen kumpulan yang berbeza. Gunakan sebelum jaminan.

4. Gunakan hujung pakai buang untuk mengelakkan pencemaran silang. Elakkan pipet dengan bahagian logam semasa melukis larutan henti dan substrat A dan B.

5. Gunakan bekas plastik yang bersih untuk mengkonfigurasi penyelesaian basuh. Campurkan semua bahan dan sampel dalam kit dengan teliti sebelum digunakan.

6. Basuh plat enzim hendaklah dikeringkan sepenuhnya, jangan letakkan kertas penyerap terus ke dalam reaksi standard enzim dengan baik untuk menyerap air.

7. Substrat A hendaklah meruap untuk mengelak membuka penutup untuk jangka masa yang lama. Substrat B adalah sensitif kepada cahaya dan mengelakkan pendedahan berpanjangan kepada cahaya. Elakkan sentuhan dengan tangan dan menjadi toksik. Nilai OD hendaklah dibaca sejurus selepas percubaan selesai.

8. Susunan penambahan reagen hendaklah konsisten untuk memastikan semua telaga diinkubasi pada masa yang sama.

9. Pengeraman dijalankan mengikut masa yang dinyatakan dalam arahan, jumlah penambahan dan susunan.

Kaedah pengumpulan, pemprosesan dan penyimpanan sampel

1. Serum ---- Elakkan sebarang kerengsaan sel semasa prosedur. Gunakan tiub tanpa pirogen dan endotoksin. Selepas mengumpul darah, serum dan sel darah merah diasingkan dengan cepat dan berhati-hati dengan sentrifugasi pada 1000 xg selama 10 minit.

2, plasma ----- EDTA, sitrat, plasma heparin boleh digunakan untuk ujian. Pelet dikeluarkan dengan sentrifugasi pada 1000 xg selama 30 minit.

3. Supernatan sel - 1000 xg disentrifugasi selama 10 minit untuk mengeluarkan zarah dan polimer.

4, tisu homogenat ----- tisu ditambah kepada jumlah yang sesuai mash masin fisiologi. Empar pada 1000 × g selama 10 minit, ambil supernatan

5. Penyimpanan ------ Jika sampel tidak digunakan serta-merta, ia hendaklah dibahagikan kepada bahagian-bahagian kecil - 70 °C untuk mengelakkan pembekuan berulang. Jangan gunakan hemolisis atau hiperlipemia sebanyak mungkin. Jika terdapat sejumlah besar zarah dalam serum, sentrifuge atau penapis sebelum ujian. Jangan panaskan cair pada 37 ° C atau lebih tinggi. Ia perlu dicairkan pada suhu bilik dan pastikan sampel dicairkan sepenuhnya dengan sekata.

[ Collagenase II ( ELISan ) ELISA Kit ] Penyediaan reagen

1. Piawaian: Pencairan bersiri piawai hendaklah disediakan semasa eksperimen dan tidak boleh disimpan. Campurkan shake standard sebelum pencairan. Nisbah pencairan adalah seperti berikut:

2. Pencairan penimbal basuh (50 x): 50 kali ganda pencairan air suling.

Langkah

1. Campurkan semua reagen dengan teliti sebelum digunakan. Jangan biarkan cecair menghasilkan buih dalam jumlah yang banyak, untuk mengelakkan penambahan sejumlah besar gelembung udara semasa pemuatan, mengakibatkan ralat dalam pemuatan.

2. Bilangan selat yang diperlukan ditentukan oleh bilangan sampel yang akan diuji ditambah dengan bilangan piawai. Berbilang lubang disyorkan untuk setiap lubang standard dan kosong. Setiap sampel ditentukan mengikut kuantitinya sendiri, dan mungkin menggunakan lubang berganda sebanyak mungkin untuk membuat lubang berganda. Spesimen telah dicairkan 1:1 dengan pencairan spesimen dan 50 ul telah ditambah kepada telaga tindak balas.

3. 50 ul piawai yang dicairkan telah ditambah ke dalam telaga tindak balas, dan 50 ul sampel yang akan diuji telah ditambah kepada telaga tindak balas. Tambah segera 50 ul antibodi terbiotinilasi. Tutup membran, campurkan perlahan-lahan dengan menggoncang, dan eramkan selama 1 jam pada suhu 37 °C.

4. Keluarkan cecair dari perigi, isi setiap perigi dengan larutan pencuci, goncang selama 30 saat, keluarkan larutan pencuci, dan keringkan dengan kertas penyerap. Ulangi operasi ini sebanyak 3 kali. Jika membasuh dengan mesin basuh, bilangan basuhan ditambah sekali.

5. 80 ul afiniti streptavidin-HRP telah ditambah pada setiap telaga, dan campuran itu digoncang perlahan-lahan dan diinkubasi pada 37 ° C selama 30 minit.

6. Keluarkan cecair dari perigi, isi setiap perigi dengan larutan pencuci, goncang selama 30 saat, keluarkan larutan pencuci, dan keringkan dengan kertas penyerap. Ulangi operasi ini sebanyak 3 kali. Jika membasuh dengan mesin basuh, bilangan basuhan ditambah sekali.

7. Tambahkan 50 μl setiap substrat A dan B ke dalam setiap perigi, gaul perlahan-lahan dengan menggoncang, dan eramkan pada suhu 37 ° C selama 10 minit. Elakkan pencahayaan.

8. Keluarkan plat mikro dan cepat tambah 50 ul larutan henti. Sejurus selepas menambah penyelesaian henti, keputusan harus ditentukan.

9. Nilai OD setiap telaga diukur pada panjang gelombang 450 nm.

Protokol percubaan yang disyorkan

had

Keputusan di atas piawaian No. 6 adalah bukan linear dan tiada keputusan tepat boleh diperolehi daripada keluk piawai ini.

Prestasi kit kolagenase II (Collagenase II) ELISA

1. Kepekaan: Kepekatan pengesanan minimum adalah kurang daripada piawaian No. 1. Kelinearan pencairan. Pekali regresi linear sampel dan nilai R pekali korelasi kepekatan jangkaan ialah 0.990.

2. Kekhususan: Tidak bertindak balas dengan sitokin lain.

3. Kebolehulangan: Pekali variasi antara plat dan plat adalah kurang daripada 10%.

Menganalisis hasil analisis

1. Nilai instrumen: baca nilai OD setiap lubang pada pembaca plat mikro dengan panjang gelombang 450 nm.

2. Nilai OD penyerapan ialah ordinat (Y), dan kepekatan piawai Kolagenase II yang sepadan ialah absis (X), dan lengkung yang sepadan diperolehi. Kandungan Collagenase II sampel boleh ditukar daripada lengkung piawai mengikut nilai OD. penumpuan.

3. Julat pengesanan: 0-80ng/ml

4. Kepekaan: 0.1 ng/ml

Shanghai Fanke Biotechnology mengkhusus dalam pengeluaran dan pembekalan kit: ELISA anti-sandwic berganda, kit ELISA, kit ELISA manusia, kit pengesanan berkaitan enzim, reagen yang diimport dalam negara, kit elisa, kit ELISA, kit ELISA tikus, kit ELISA tetikus, kit faktor kualiti ELISA yang berkaitan dengan apoptosis, kit faktor kualiti ELISA dan makmal lain yang berkaitan dengan makmal. jaminan kualiti.

Prestasi kit:

1 sensitiviti: kepekatan pengesanan minimum adalah kurang daripada 1 standard. LiCollagenase IIariiti pencairan. Sampel regresi liCollagenase IIar dan nilai R pekali korelasi kepekatan jangkaan ialah 0.990.

2: tiada tindak balas khusus dengan sitokiCollagenase II yang lain.

3 repeaCollagenase IIiliity: plat, plat antara pekali variasi adalah kurang daripada 10%.

Langkah-langkah kit ELISA cincin peptida amino procollagen jenis III manusia:

1 sebelum digunakan, semua reagen dan pencampuran. Jangan biarkan cecair menghasilkan sejumlah besar gelembung, untuk mengelakkan penambahan sejumlah besar gelembung, mengakibatkan penambahan ralat.

Setiap sampel dan lubang lubang disyorkan untuk melakukan lubang. Setiap sampel boleh dibuat mengikut kuantitinya sendiri, dan boleh digunakan sebagai lubang dalam lubang.

3 dicairkan selepas 50ul standard dalam lubang tindak balas, ditambah kepada sampel 50 UL dalam lubang tindak balas untuk diukur. Serta-merta sertaiCollagenase IId biotin antibodi 50 UL. Tutup plat membraCollagenase II, adunan berayun perlahan, 37 darjah Celsius selama 45 minit.

4 cecair lubang kiri, setiap lubang diisi dengan cecair pencuci, berayun 30 saat dari cecair basuh, keringkan dengan kertas penyerap. Ulangi operasi ini sebanyak 4 kali. Jika machiCollagenase II basuh dengan basuhan, masa mencuci meningkat sekali.

5 setiap lubang menambah enzim pertalian rantai -HRP 100ul, pencampuran berayun perlahan, 37 darjah 30 minit pengeraman.

6 cecair lubang kiri, setiap lubang diisi dengan cecair pencuci, berayun 30 saat dari cecair basuh, keringkan dengan kertas penyerap. Ulangi operasi ini sebanyak 4 kali. Jika machiCollagenase II basuh dengan basuhan, masa mencuci meningkat sekali.

7 setiap lubang menambah substrat A, B 50ul, pencampuran berayun perlahan, 37 darjah 5 minit pengeraman. Elakkan cahaya.

8 keluarkan plat ELISA, cepat tambah 50ul cecair ditamatkan, menambah penyelesaian berhenti serta-merta selepas keputusan penentuan.

9 od penentuan setiap lubang pada panjang gelombang 450nm.

Keputusan penghakiman dan analisis:

1, nilai instrumen: Yu Bo 450nm ELISA od membaca lubang pada instrumen

2, kepada nilai OD sebagai koordinat menegak (y), kepekatan piawai yang sepadan sebagai koordinat mendatar (x), mempunyai lengkung yang sepadan, kandungan sampel ot boleh mengikut nilai OD dengan penukaran lengkung standard keluar kepekatan yang sepadan, didarab Dengan berbilang pencairan; atau dengan kepekatan standard dan nilai OD dikira persamaan regresi lengkung piawai, nilai OD sampel dalam persamaan untuk mengira kepekatan sampel, didarab dengan faktor pencairan adalah kepekatan sebenar sampel.

3, julat pengesanan: 0-100ng/ml

4, kepekaan: 0.39ng/ml