Teknologi pencernaan tisu enzimatik - daripada kolagenase mentah kepada produk penghadaman ketulenan tinggi
Kolagenase, yang biasa digunakan dalam pencernaan tisu enzimatik, secara khusus merendahkan kolagen ekstraselular, memisahkan rangkaian kolagen dan fibronektin tanpa merosakkan integriti struktur permukaan sel. Oleh kerana komposisi kompleks matriks ekstraselular, selain kolagen, ia juga mengandungi struktur makromolekul lain seperti elastin dan glikoprotein. Selain itu, jenis tisu yang berbeza, sumber spesies yang berbeza, dan kumpulan umur yang berbeza mempunyai komponen matriks ekstraselular yang berbeza. Oleh itu, produk kolagenase komersial secara amnya adalah ekstrak kasar Clostridium lysate lysate, campuran enzim proteolitik seperti kolagenase dan trypsin, yang boleh merendahkan kolagen dan protein lain, dan bahan makromolekul ekstrasel seperti polisakarida. Aplikasi pencernaan dalam pelbagai tisu.
Walau bagaimanapun, untuk tisu khusus yang diasingkan dalam kajian eksperimen yang berbeza, adalah perlu untuk memilih produk kolagenase yang sesuai mengikut pengalaman, dan untuk meneroka kepekatan enzim, jumlah enzim dan masa tindakan enzim untuk mencari skema penghadaman yang terbaik.
Contoh Pemilihan Produk Roche Collagenase
Produk Roche collagenase diekstrak daripada Clostridium histolyticum dan dikelaskan kepada Collagenase A/B/D/P/H mengikut aktiviti enzim yang berbeza dan aplikasi berfungsi yang disahkan. Ia digunakan secara meluas dalam pengasingan sel tunggal dalam pelbagai tisu seperti paru-paru, jantung, otot, tulang, tisu adiposa, hati, buah pinggang, rawan, payudara, plasenta, saluran darah, tisu otak dan tisu tumor. Hasil sel, aktiviti dan fungsi sel yang diperolehi oleh aplikasi tertakluk pada kawalan kualiti dan pengesahan produk yang ketat.
Pengelasan Roche Collagenase | Komponen enzim utama | Aplikasi organisasi yang disyorkan (berdasarkan rujukan produk dalam literatur) |
Kolagenase A | Kolagenase jenis I, kolagenase jenis II, clostripain, trypsin, protease neutral Nisbah pencampuran enzim konvensional, aktiviti enzim sederhana | Oosit Sel paru-paru |
Kolagenase B | Kolagenase jenis I, kolagenase jenis II, clostripain, trypsin, protease neutral Aktiviti kolagenase sederhana hingga tinggi, aktiviti protein Clostridium yang lebih tinggi (>10U/mg) | Kardiomiosit Kondrosit Sel prekursor embrio |
Kolagenase D | Kolagenase jenis I, kolagenase jenis II, clostripain, trypsin, protease neutral Aktiviti kolagenase sederhana hingga tinggi, aktiviti trypsin sangat rendah (<0.2U/mg) | Limfosit sel dendritik |
Kolagenase P | Kolagenase yang sangat aktif, Clostridin, trypsin, protease neutral Produk yang disahkan untuk pengasingan sel pulau kecil | sel pulau kecil Kondrosit sel T |
Kolagenase H | Kolagenase jenis I, kolagenase jenis II, clostripain, trypsin, protease neutral Produk yang disahkan untuk pengasingan hepatosit | Hepatosit Fibroblas gemuk |
Petua:
Jika tisu anda sedang dalam proses penghadaman dan penyebaran enzimatik, sel lekatan gelatin muncul, yang menjejaskan penyebaran sel. Ia mungkin disebabkan oleh lekatan DNA yang dilepaskan ke ruang ekstraselular dalam sel yang rosak. Lekatan sel boleh diperolehi dengan penambahan DNase. Penyerakan yang lebih baik.
Kerana enzim mentah Collagenase juga mengandungi pelbagai protease, seperti amilase dan lipase, ia juga mencerna protein pada permukaan sel, menyebabkan kerosakan tertentu pada sel. Selain itu, kolagenase mentah tidak mengekalkan kualiti yang konsisten dan aktiviti enzim merentas kelompok. Walaupun anda menggunakan kumpulan kolagenase yang berbeza untuk penghadaman dalam tisu yang sama, anda masih perlu mengoptimumkan kepekatan enzim, isipadu enzim dan masa tindakan enzim.
Jadi bagaimana anda membuat organisasi anda mencerna percubaan dengan sedikit usaha?
Produk Roche Dispase ®
Roche Dispase ® boleh digunakan untuk penyediaan sel primer dalam pelbagai tisu dan organ. Oleh kerana sifatnya yang ringan, ia boleh menyebabkan kerosakan minimum pada sel semasa penghadaman. Ia juga boleh digunakan untuk subkultur sel dan untuk penggantungan sel. Gumpalan dalam cecair mencerna dan menyahpolimer. Dispase ® ialah protease neutral yang telah dimurnikan yang diekstrak daripada Bacillus polymyxa untuk menghapuskan kemungkinan pencemaran mikoplasma dan mempunyai kestabilan yang baik di bawah pelbagai keadaan pH dan suhu, jadi ia sedang dalam proses penghadaman tisu. Prestasinya lebih stabil daripada kolagenase.
Dispase ® Roche pemisahan tertentu dalam epidermis dan sel-sel kulit tisu kortikal kultur diperolehi dalam pelbagai aplikasi. Perbezaan antara Dispase ® I dan Dispase ® II ialah perbezaan dalam ketulenan. Dispase ® I disterilkan penapis dan ketulenan dan aktiviti enzim setiap mg Dispase ® I adalah jauh lebih tinggi daripada Dispase ® II.
Roche High Purity Research Level Enzim Campuran Liberase Gred Penyelidikan Campuran Enzim
Campuran Enzim Gred Penyelidikan Liberase mengandungi satu siri campuran enzim yang terdiri daripada campuran nisbah berbeza protease neutral (non-clostridium protease) dan Collagenase I + Collagenase II ketulenan tinggi. Dalam kebanyakan aplikasi, Liberase menggantikan kolagenase tradisional dan meningkatkan hasil sel, daya maju sel dan fungsi sel.
Di bawah keadaan penapaian dan penulenan enzim yang ketat, Campuran Enzim Gred Penyelidikan Liberase mengeluarkan enzim seperti Clostridin dan trypsin, menyingkirkan >98% endotoksin dan komponen sel mati yang lain daripada bahan mentah, sekali gus menyumbang kepada organisasi. Semasa proses penghadaman, daya maju sel sangat dipertingkatkan. Siri Liberase adalah disterilkan penapis dan mempunyai konsistensi kelompok-ke-kelompok yang tinggi, memastikan kualiti penghadaman dan kebolehulangan sepanjang fasa percubaan.
Produk Liberase | Kandungan kolagenase (mg/tiub) | Aktiviti kolagenase (Wünschunits/tiub) | Jumlah protease neutral | Protease neutral bertindak ke atas aktiviti enzim tisu | Jenis protease neutral | Endotoksin (EU/mg) |
Liberase DL | 5mg 50mg | 26 260 | rendah | + | Buang | ≤50 |
Liberase DH | 5mg 50mg | 26 260 | tinggi | +++ | Buang | ≤50 |
Liberase TL | 5mg 50mg | 26 260 | rendah | ++ | Thermolysin | ≤50 |
Liberase TM | 5mg 50mg | 26 260 | sederhana | ++++ | Thermolysin | ≤50 |
Liberase TH | 5mg 50mg | 26 260 | tinggi | +++++ | Thermolysin | ≤50 |
Perbandingan penggantian Roche collagenase dan produk siri Liberase
Roche Collagenase | ciri | Wünschunits/mg | Produk Liberase aktif yang sepadan |
Kolagenase A | Campuran enzim kasar | 0.15 | Liberase TM |
Kolagenase B | Campuran enzim kasar | 0.15 | Liberase TH |
Kolagenase D | Campuran enzim kasar | 0.15 | Liberase TM |
Kolagenase P | Campuran enzim kasar | 1.50 | Liberase TL, Liberase DL |
Kolagenase H | Campuran enzim kasar | 0.15 | Liberase TM |
Petua:
1. Produk siri Liberase dibahagikan kepada lima jenis produk dengan aktiviti pencernaan yang berbeza mengikut nisbah kolagenase dan protease neutral yang berbeza. Anda boleh merujuk kepada kajian makmal lain atau literatur yang diterbitkan untuk pemilihan produk yang sesuai dan rujukan kepada prosedur operasi.
Https://?id=col_030100
2. Untuk percubaan penghadaman sel tisu baharu, adalah disyorkan untuk memulakan percubaan anda dengan LiberaseTM, yang mempunyai fleksibiliti yang baik untuk pelbagai tisu.
3. Ketulenan Collagenase I + II dalam Liberase adalah sangat tinggi, dan masa pengeraman biasanya dikurangkan sebanyak 10 – 30% berbanding dengan eksperimen penghadaman kolagenase konvensional.
Sila ambil perhatian: Produk Gred Penyelidikan Liberase dan produk enzim pencernaan lain adalah untuk penyelidikan sains hayat dan penyelidikan in vitro sahaja. Jangan gunakan produk ini untuk prosedur klinikal dan diagnostik (cth pemindahan pulau kecil manusia).
Untuk maklumat lanjut tentang produk Liberase, sila klik untuk memuat turun manual.
Sichuan Yuanda Shuyang Pharmaceutical Co., Ltd.
