Kolagenase I tetikus (Collagenase I) Kit Pengesanan Kuantitatif (ELISA)

Kolagenase I tetikus (Collagenase I) Kit Pengesanan Kuantitatif (ELISA)

Panduan pengguna

【Nama kit】

Kolagenase I tetikus (Collagenase I) Kit Pengesanan Kuantitatif (ELISA)

【Penggunaan kit】

Pengesanan kuantitatif kolagenase I (Collagenase I) dalam serum tikus, plasma dan sampel cecair yang berkaitan.

【Prinsip pengesanan】

Kit ini menggunakan ujian imunosorben berkait enzim (ELISA) antibodi berganda antibodi satu langkah. Piawaian, sampel ujian dan penyelesaian kerja berlabel enzim telah ditambahkan pada plat berlabel enzim lutsinar yang diprasalut dengan antibodi kolagenase I (Collagenase I) tikus, dan selepas pengeraman untuk masa yang mencukupi, komponen yang tidak terikat telah dihanyutkan. Tambah pembangun A dan B pula, pembangun (TMB) ditukar menjadi produk biru yang dimangkin oleh lobak pedas peroksidase (HRP), dan bertukar menjadi kuning di bawah tindakan asid. Kepekatan kolagenase I (Collagenase I) berkorelasi secara positif. Nilai OD diukur pada panjang gelombang 450 nm. Berdasarkan nilai OD standard dan sampel, kandungan kolagenase I (Collagenase I) tikus dalam sampel telah dikira.

【Komposisi kit】

1

Plat bersalut enzim

12 lubang × 4 jalur

7

Pemaju A cecair

3mL

2

Produk standard: 96ng / mL

0.6mL

8

Cecair pemaju B

3mL

3

20 kali cecair pencuci pekat

15mL

9

Hentikan penyelesaian

3mL

4

Pencairan standard

3mL

10

Arahan

1 hidangan

5

Sampel pencair

3mL

11

Filem pengedap

2 helai

6

Reagen enzim

5mL

12

beg tertutup

1

Catatan: Produk standard dicairkan dengan pelarut produk standard mengikut urutan: 96, 48, 24, 12, 6, 3 ng / mL

[Reagen dan peralatan diperlukan tetapi tidak disediakan]

1. Termostat 37 ℃

2. Pembaca plat mikro spesifikasi standard

3. Pipet ketepatan dan petua pakai buang

4. Air suling

5. Tabung uji pakai buang

6. Kertas penyerap

【Langkah】

1. Penyediaan: Keluarkan kit reagen dari peti sejuk dan seimbangkan semula pada suhu bilik selama 30 minit.

2. Campuran larutan: cairkan larutan pencuci pekat 20 kali ganda dengan air suling kepada yang asal.

3. Tambah produk dan sampel standard untuk diuji: ambil bilangan plat bersalut enzim yang mencukupi dan pasangkannya pada bingkai. Sediakan telaga piawai, telaga sampel untuk diuji dan telaga kawalan kosong, rekodkan kedudukan setiap telaga dalam telaga piawai. Tambah 50μL standard; tambah 10μL sampel yang akan diuji ke dalam telaga sampel, dan kemudian tambah 40μL pelarut sampel (iaitu, sampel dicairkan 5 kali); tambahkan 100μL larutan kerja berlabel enzim pada setiap telaga; tiada kawalan kosong dengan baik.

4. Pengeraman: Inkubasi dalam tab mandi air 37 ° C atau termostat selama 60 minit.

5. Basuh pinggan: buang cecair, tepuk kering pada kertas penyerap, isi setiap perigi dengan cecair pencuci, biarkan selama 1min, goncangkan cecair basuh, tepuk kering pada kertas penyerap, ulang basuh 5 kali dengan cara ini Arahan untuk mencuci papan).

6. Pembangunan warna: tambah 50 μL larutan pembangun A ke setiap telaga, kemudian tambah 50 μL larutan pembangun B, dan kembangkan warna pada 37 ° C dalam gelap selama 15 minit.

7. Penamatan: Keluarkan plat pelabelan enzim dan tambah 50μL larutan henti pada setiap telaga untuk menghentikan tindak balas (warna berubah dari biru kepada kuning).

8. Penentuan: Sifarkan lubang kosong, dan dalam masa 15 minit selepas penamatan, ukur penyerapan (nilai OD) setiap telaga dengan panjang gelombang 450 nm.

9. Pengiraan: Mengikut kepekatan produk piawai dan nilai OD yang sepadan, hitung persamaan regresi linear bagi lengkung piawai, dan kemudian hitung kepekatan sampel yang sepadan pada persamaan regresi mengikut nilai OD sampel. Anda juga boleh menggunakan pelbagai perisian aplikasi untuk Pengiraan. Kepekatan akhir ialah kepekatan yang diukur sebenar dikali faktor pencairan.

[Keperluan sampel]

1. Sampel tidak boleh mengandungi natrium azida (NaN3) kerana natrium azida (NaN3) adalah perencat lobak pedas peroksidase (HRP).

2. Spesimen hendaklah diekstrak secepat mungkin selepas pengumpulan. Pengekstrakan hendaklah dijalankan mengikut literatur yang berkaitan. Eksperimen hendaklah dijalankan secepat mungkin selepas pengekstrakan. Jika ujian tidak dapat dilakukan dengan segera, spesimen boleh disimpan pada -20 ℃, tetapi pembekuan dan pencairan berulang harus dielakkan.

3. Sampel hendaklah disentrifugasi sepenuhnya, tanpa hemolisis dan zarah.

【Langkah berjaga-berjaga】

1. Eksperimen dijalankan mengikut arahan yang ketat, dan keputusan eksperimen mesti ditentukan oleh bacaan pembaca plat mikro.

2. Jika papan bersalut berlabel enzim tidak digunakan selepas dibuka, ia hendaklah dimasukkan ke dalam beg tertutup dan ditambah dengan bahan pengering serta-merta.

3. Adalah disyorkan bahawa semua piawaian, sampel dan kawalan kosong diuji dalam pendua, dan nilai purata diambil untuk mengurangkan ralat percubaan.

4. Jika warna terlalu terang, masa pengeraman substrat boleh dilanjutkan dengan betul.

5. Untuk mengelakkan pencemaran silang, standard, sampel dan kawalan kosong hendaklah digantikan dengan tip untuk setiap tambahan; komponen biasa seperti larutan kerja enzim, pelarut sampel dan substrat hendaklah ditambah dengan julur, dan tidak boleh menyentuh perigi mikro; Jangan gunakan semula filem pengedap.

6. Kit digunakan dalam tempoh jaminan, dan kumpulan reagen yang berbeza tidak boleh dicampur.

7. Substrat B adalah sensitif kepada cahaya dan mengelakkan pendedahan berpanjangan kepada cahaya.

[Ringkasan prosedur operasi]

Sediakan reagen, sampel dan piawai

Tambah sampel, piawaian dan penyelesaian kerja piawai enzim yang disediakan, dan bertindak balas pada 37 ℃ selama 60 minit

Basuh pinggan 5 kali, tambahkan larutan A dan B yang membentuk warna, dan kembangkan pada suhu 37 ℃ selama 15 minit

Tambah penyelesaian hentian

Baca nilai OD dalam masa 15 minit

Pengiraan

【julat peperiksaan】

3-96ng / mL

【spesifikasi】

48 hidangan / kotak

【Storan】

Simpan pada suhu 2-8 ℃, terlindung daripada cahaya dan kelembapan.

【Kesahan】

6 bulan